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层析柱使用常见问题盘点
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   层析柱使用常见问题盘点
  “ 层析柱进气泡怎么办? ”
  答疑解惑层析柱进气泡有多种可能的原因,对于这些不同的原因,要采取不同的措施,才能事半功倍,解决气泡困扰:
  1.空气进入层析柱(如:缓冲液走空,连接层析柱进入系统过程中等)
  用纯水反向冲洗层析柱(如有柱位阀可直接切换流向,没有的话可将柱子反接
  对于大多数层析柱来说可用乙醇冲洗,以提高排除气泡的效率
  2.缓冲液中有气泡采取预防措施将缓冲液脱气
  在缓冲液入口使用空气感应器
  使用限流阀
  3.温度影响(在冷室操作后紧接着在室温操作或低温缓冲液直接在室温使用)采取预防措施允许缓冲液在使用前达到热平衡
  “ 层析柱干了还可以再使用吗? ”
  答疑解惑通常来说是不可以的,但也取决于您的纯化需求。如果您的层析柱看起来像图中这样,不妨一试。可将溶液以接近填料zui大耐受压力的流速流经层析柱以排除空气。结束之后,进行柱效测定,满足您的要求便可继续使用;如未成功排除气泡,则层析柱需要重装。
  “ 胶平面与柱头有间隙怎么办? ”
  答疑解惑造成间隙的有多种可能的原因,对于这些不同的原因,要采取不同的措施,才能事半功倍,解决间隙困扰
  1.由于不当装填或者筛网孔径与填料粒径不匹配,导致填料漏出
  更换筛网,重新装填
  2.层析柱堵塞,导致反压增大
  根据说明书清洗层析柱
  更换滤膜采取预防措施澄清样品
  3.柱床装填太差(装柱过程中未有效压缩填料)
  调整柱头高度,测柱效
  4.填料被用于极端条件,如有机溶剂
  检查缓冲液选择更加合适的使用条件
  “ 怎样避免由于样品导致的压力增大 ”
  答疑解惑不同杂质会带来不同的不良影响,对于这些不同的原因,要采取不同的措施,才能事半功倍,解决压力增大困扰
  1.颗粒性物质——堵塞滤膜和层析柱离心过滤有吸附的小体积样品可用10000 g 离心15分钟
  细胞裂解液可50000g离心30分钟过滤醋酸纤维素膜或PVDF膜具有zui少的非特异性蛋白吸附
  选择合适孔径的滤器
  2.沉淀——聚集体堵塞层析柱
  过滤
  通过改变pH,加盐或添加剂稳定样品或减少聚体产生
  避免机械压力和过高的蛋白浓度
  3.核酸——过高粘度可能会封闭填料上的配基
  加入核酸酶
  使用硫酸链霉素,聚乙烯亚胺或硫酸鱼精蛋白沉淀
  4.脂类——可能封闭填料上的配基或堵塞滤膜和层析柱
  离心
  使用硫酸铵,硫酸葡聚糖或PVP沉淀
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