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你需要知道的层析柱知识
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  收好这一份层析柱使用指南,帮您在实验过程中从容应对各种突发状况,更好的完成实验操作。
 
  1.层析柱进气泡怎么办?
 
  空气进入,如缓冲液走空,连接进入系统过程中
 
  ○ 用纯水反向冲洗,如果有柱位阀可直接切换流向,没有的话可将柱子反接
 
  ○ 对于大多数层析柱来说可用乙醇冲洗,以提高排气效率
 
  缓冲液中有气泡
 
  ○ 上柱前将缓冲液脱气
 
  ○ 在缓冲液入口使用空气感应器
 
  温度影响,如在冷室操作后马上在室温操作,或低温缓冲液直接在室温使用
 
  ○ 将缓冲液在使用前达到热平衡
 
  2.层析柱干了还可以再使用吗?
 
  ○ 通常不可以,但也取决于具体的纯化需求。
 
  3.胶平面与柱头有间隙怎么办?
 
  由于不当装填或者筛网孔径与填料粒径不匹配,导致填料漏出
 
  ○ 更换筛网,重新装填,层析柱堵塞,导致反压增大
 
  ○ 根据说明书清洗
 
  ○ 更换滤膜
 
  ○ 样品上柱前先澄清
 
  柱床装填太差,装柱过程中未有效压缩填料
 
  ○ 调整柱头高度,测柱效填料被用于极端条件,如有机溶剂
 
  ○ 检查缓冲液,选择合适的缓冲液条件
 
  4.怎样避免由于样品导致的压力增大?
 
  颗粒性物质——堵塞滤膜和层析柱
 
  ○对于滤膜吸附较高的的样品,体积较小时,可以用离心代替过滤,比如10000g离心15分钟
 
  ○ 细胞裂解液可50000g离心30分钟
 
  ○ 可以使用醋酸纤维素膜或者PVDF膜,其对蛋白的非特异性吸附较低
 
  ○ 选择合适孔径的滤器
 
  沉淀或者聚体堵塞层析柱
 
  ○ 过滤
 
  ○ 通过改变pH,加盐或添加剂稳定样品或减少聚体产生
 
  ○ 避免机械压力和过高的蛋白浓度
 
  核酸——过高粘度可能会封闭填料上的配基
 
  ○ 加入核酸酶
 
  ○ 使用硫酸链霉素,聚乙烯亚胺或硫酸鱼精蛋白沉淀
 
  脂类——可能封闭填料上的配基或堵塞滤膜和层析柱
 
  ○ 离心
 
  ○ 使用硫酸铵,硫酸葡聚糖或PVP沉淀
 
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