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酶标板与多孔细胞培养板的差别
发布时间:2016-03-30 点击次数:1433次
酶标板与多孔细胞培养板的差别
用多空细胞培养板测吸光度肯定可以拉,我们经常用它来做样品的蛋白定量和MTT检测。
区别:酶标板一般要比细胞培养板贵,细胞板主要做细胞培养,但也可以用来测蛋白浓度;酶标板包括包被板和反应板,一般不能用做细胞培养,它主要做免疫酶联反应后的蛋白检测,它需要更高的要求还需要特定的酶标工作液。如下是个用酶标板检测冠状病毒IgM/IgG抗体例子:
【操作步骤】
1.加样品:将标本稀释液100ul(或2滴)加到包被板内(预留阴阳性及空白对照2-5孔),将待检血清用PBS或生理盐水按1:20稀释后取10ul加入反应孔内。
2.加对照:加入阴性对照1-3孔,阳性对照1孔,各100ul对照血清。空白对照1孔空置。
3.温育:将反应板震荡使样品混匀后,置37℃温箱或水浴反应20分钟。
4.洗板:用蒸馏水将浓缩洗涤液15ml稀释至300ml。
(1)手洗:将反应板孔内容物倾出,将洗涤液注满反应孔,放置30秒钟后用力甩去,如此重复5次后拍干。
(2)机洗:5次,每孔注入洗涤液200ul或注满,停留30秒钟后吸尽拍干。
5.加酶标工作液:每孔加入100ul(或2滴)酶标工作液,置37℃温箱反应20分钟后,洗板5次,洗板操作同步骤4。
6.显色和终止反应:将底物A、B液各50ul(或1滴)加到反应孔内,37℃避光显色10分钟。每孔加入终止液50ul(或1滴)混匀终止反应。
【结果判定】
1.酶标仪设定波长450nm,先用空白调零,然后测定各孔OD值;如果选用双波长测定,不必设置空白对照孔。
2.当阴性对照平均OD值小于0.08,阳性对照(pc)OD值大于0.30时,说明试剂盒有效且实验操作正确,否则应当重复试验。
3.临界值(CUT—OFF VALUE)=0.15+阴性对照平均(NC)OD值(当阴性平均OD值小于0.05时,按0.05计算;当阴性平均OD值大于或等于等于0.05时按实际值计算)。
4.标本OD值≤临界值为阴性,标本OD值>临界值为阳性
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