层析柱安装的每一个步骤都很关键

层析柱是凝胶层析技术中的主体，一般用玻璃管或有机玻璃管。根据样品混合物中各组分在固定相和流动相中分配系数不同，从而分离的一种层析法。层析柱的直径大小不影响分离度，样品用量大，可加大柱的直径，一般制备用凝胶柱，直径大于2厘米，但在加样时应将样品均匀分布于凝胶柱床面上。此外， 直径加大，洗脱液体体积增大，样品稀释度大。分离度取决于柱高，为分离不同组分，凝胶柱床必须有适宜的高度，分离度与柱高的平方根相关，但由于软凝胶柱过高挤压变形阻塞，一般不超过1米。分族分离时用短柱，一般凝胶柱长20-30厘米，柱高与直径的比较5:1─10:1，凝胶床体积为样品溶液体积的4-10倍。 分级分离时柱高与直径之线为20:1─100:1，常用凝胶柱有50×25厘米，10×25厘米。层析柱滤板下的死体积应尽可能的小，如果支掌滤板下的死体积大，被分离组分之间重新混合的可能性就大，其结果是影响洗脱峰形，出现拖尾出象，降低分辩力。在分离时，死体积不能超过总床体积的1/1000。

简述层析柱的安装流程：

1、检测层析柱的各个部件，确保干净、完整，拧上下端堵头，拧紧膨胀圈，然后将层析柱垂直 固定在铁架台上，将装柱器安装在层析柱上端。  

2、往层析柱中加入适量的20%乙醇，打开下端口，重力流，排除下筛网中滞留的气泡，在液面 低至1-2cm高度时关闭层析柱下端出口。

3、用玻璃棒紧靠柱子内壁引流，将摇匀的介质加入到层析柱中，这可以减少气泡的产生。迅速 用20%乙醇填满柱子和装柱器，装上装柱器盖子，连接到?KTA上。

4、打开层析柱下端，开始以30cm/h流速装柱，直至柱床界面平稳，停止装柱，打开装柱器盖子，用虹吸法去除界面上端的液体，去掉装柱器，然后小心的用20%乙醇封满 柱子剩余部分。

5、拧紧膨胀圈，继续用装柱流速压柱，至少保持3个柱体积，以界面不变为主，在界面处做上记号，关闭泵，并关闭柱子下端出口，使层析柱上端和泵断开（转接器上接口是打开的），略拧松 膨胀圈，缓慢向下转动调节杆，到记号处停止，然后再拧紧膨胀圈，关闭上接口。

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