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不同的层析柱应该如何确定上样量

发布时间:2017-09-14浏览:953次

   不同的层析柱应该如何确定上样量

  在做层析实验的时候可能时常会遇到一个问题:一次实验可以上多少样品呢?多也不是少也不是,上样多了会造成一部分样品损失或者达不到预期的分离效果,上样少了无法充分使用层析柱还要增加重复实验或者使用更大层析柱,真是件纠结的事情。我们今天要来给大家介绍的就是不同的层析柱应该如何确定上样量。
  层析柱上样量由柱体积和所使用填料载量决定
  柱体积(CV):层析柱中装填的填料的总体积,根据层析柱的截面积及填料装填的高度计算得到。
  载量:填料在一定条件下填料结合目的分子的能力,分为静态载量和动态载量。
  静态载量(有效载量)
  在一定的条件下,可以结合在层析填料上的真实样品的数量,它是使用真实的样品和介质充分浸润饱和,然后测定结合在填料上的样品总量。pH、离子强度、添加剂以及样品等因素都会影响有效结合载量。实验条件改变,有效结合载量也会变化。
  动态载量
  在一定的运行条件下,可以结合在层析柱上的样品数量。除pH,离子强度,添加剂以及样品以外,运行流速也会影响动态结合载量。一般来说,流速越低,动态结合载量越高。如果流速接近于零,动态结合载量等于有效载量。
  层析都是在一定流速下进行的,故填料的动态载量更能有效地用于上样量的确定。对于特定填料或层析柱来说,说明书都会给出对于某种特定蛋白其动态结合载量,同时给出相应的测定条件,可作为实际实验中上样量的参考。

 

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